[VIP第1年] 指数:3
在cns，pirb的功能和下游抑制性信号通路仍然未被阐明，因此迫切需要pirb的细胞和动物模型。目前对于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制剂，或者采用慢病毒转染。前者受到是否能够透过血脑屏障和抑制剂效率的影响，后者慢病毒转染在原代细胞和在体的转染效率比较低，使研究pirb的功能受到极大的限制。为解决这些问题，我们通过crispr/cas9技术建立了pirb基因敲入小鼠，将pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位点，为研究pirb在免疫系统或者神经系统的作用和机制提供了很好的工具。技术实现要素：本发明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠动物模型。确定研究疾病目的了解影响疾病发生的内在与外在因素。长宁区皮肤疾病动物模型建模
即为本发明构建的一种pirb基因敲入的小鼠动物模型。本发明所采用第二种技术方案的特点还在于，步骤1中得到grna1和grna2后分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构。步骤3中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl。步骤4中southern杂交采用bamhi和avrii核酸内切酶切割f1代杂合子小鼠的dna。本发明的有益效果是：本发明提供了pirb基因敲入的小鼠动物模型及其构建方法，本发明的小鼠动物模型对于pirb基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础。分离自pirb基因敲入小鼠的细胞还可以用于研究pirb发挥调节作用的下游机制。虹口区正规疾病动物模型建模实验动物向小型化的发展趋势更有利于实验者的日常管理和实验操作。
可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。实施例1：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液50ml加入规格为10mg的医用顺铂(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成2mg/kg顺铂注射液，按照10ml/kg连续腹腔注射7天。实施例2：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成3mg/kg顺铂注射液,按照10ml/kg连续腹腔注射7天。实施例3建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液25ml加入规格为10mg的医用顺铂(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成4mg/kg顺铂注射液,按照10ml/kg分别在***天及第八天腹腔注射。实施例4：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中。
可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。实施例1：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液50ml加入规格为10mg的医用顺铂(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成2mg/kg顺铂注射液，按照10ml/kg连续腹腔注射7天。实施例2：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成3mg/kg顺铂注射液,按照10ml/kg连续腹腔注射7天。动物模型的意义和优越性！
流水线作业，这样能节省时间，并且能保证样品的质量。如果请人，每个人需要负责哪一板块的工作，比如谁负责麻醉，谁负责取血液，谁负责取，谁负责拍照、谁负责储存，都需要提前规划交代清楚。实验指标检测如果是需要自己做的检测，比如常见的WesternBlot、PCR，建议提前可以看看教程（无论是视频还是贴吧，都要自己多方参考）。有了一定的理论基础后，再向老师、师兄师姐学习经验和技术，如果实验平台的仪器需要提前预约，建议提前规划好使用的时间。反复总结寻找答案在整个预实验的过程中可能会出现很多问题。比如造模效果欠佳、灌胃操作不当、腹腔注射操作失误、使用不当等引起动物死亡。每遇到问题都需要自己想办法解决，可以从导师、师兄师姐、文献、贴吧、视频教程等找到答案。比如笔者曾遇到同样的给药，发现有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠还活蹦乱跳，在反复尝试调整浓度，给药剂量，更换麻醉方式，后来才发现是动物体重秤的准度有问题，导致体重秤得不准。因此，需要自己反复琢磨到底是实验过程中哪一个环节出现问题，逐一排除。也要求在每一个实验步骤需要标准化，统一化，尽可能的排除干扰因素，这样方便在遇到问题快的找到答案。同时，建议每日总结。小鼠疾病模型应用于转化医学研究中的思路与策略该研究从临床患者中筛选到潜在的致病基因。上海咨询疾病动物模型建模
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l型棒10的第二端12露在椎间孔外，有利于调整插入位置。***端11的长度大于等于第二端12的长度。在本实施例中l型棒的材料选择的是h62黄铜。在另外的实施例中其材料可以是聚乳酸等其他材料，甚至可以用1个u型棒来代替2根l型棒插入腰4椎间孔和腰5椎间孔。u型棒的两臂均为4mm长。手术成功标志为：当l型棒或u型棒正确插入，压迫到背根神经节时，手术侧的后肢肌肉呈现轻微的暂时性抽搐，且不引起鼠尾摆动。需要根据大鼠体重选择l型棒或u型棒的直径大小：当大鼠体重在200g到不足220g范围时，采用直径为；当大鼠体重在220g到不足250g范围时，采用直径为；当大鼠体重在250g到不足300g范围时，采用直径为；当大鼠体重在300g到350g范围时，采用直径为。实施例2、模型的效果检测本发明已通过实验验证了该模型的效果。通过28天的观察，确定了实施例1获得的模型稳定且准确的模拟了腰椎间盘突出压迫神经根后的跛行以及疼痛症状。图3显示了术后大鼠出现手术侧(左侧)后爪(见a部所示)没有同其他三只爪一起抓握网架，而是蜷缩着，呈现不敢承重的表现。表1大鼠术后不同天数缩足阈值(单位：g)表1显示了术后28天内11只大鼠双下肢缩足阈值的具体的均值和标准误。长宁区皮肤疾病动物模型建模
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